ND2000超微量分光光度計是一種專為微量樣本設計的分光光度計,可檢測低至1-2μL的核酸、蛋白質等生物分子的濃度和純度。其核心原理基于朗伯-比爾定律(A=εcl),通過測量特定波長(如DNA 260 nm、蛋白質280 nm)的光吸收值,計算樣本濃度。其主要由光源、單色器、樣品室、檢測器和數據處理系統組成。光源通常采用氘燈,它能發出連續的紫外光譜。單色器(如光柵或棱鏡)用于從光源發出的廣譜光線中選擇出單一波長的光。樣品室內放置了微量樣品池,其路徑長度通常在幾毫米到幾厘米之間,以適應微量樣品的測量需求。檢測器則負責捕捉經過樣品吸收后的光線強度,最后由數據處理系統進行分析和計算。
ND2000超微量分光光度計主要由以下部分組成:
一、光源
作用
光源是超微量分光光度計的起始部件,它的作用是提供穩定、足夠的光線。這些光線通常是寬頻帶的,涵蓋了從紫外到可見光甚至近紅外的波長范圍。例如,在檢測蛋白質、核酸等生物樣品時,不同波長的光被樣品吸收的程度不同,通過分析這種吸收情況來獲取樣品的信息。
類型
氘燈:主要用于紫外光區(約190-400nm)。氘燈能夠發出強烈的紫外光,其發光原理是基于氘氣在高壓電場中受到激發而發光。它具有高能量、高穩定性的特點,適用于對核酸、蛋白質等具有紫外吸收特性的物質進行檢測。
鹵鎢燈:用于可見光和近紅外光區(約360-1100nm)。鹵鎢燈是通過在燈泡內填充鹵族元素(如碘、溴等)和鎢絲來實現照明的。它在可見光范圍內能提供連續、穩定的光譜,常用于對有色化合物、生物樣品中的色素等物質進行檢測。
二、單色器
作用
單色器的作用是將光源發出的復合光分解為單一波長的光。因為在分光光度計測量過程中,需要精確地選擇特定波長的光來照射樣品,以獲得準確的吸光度值。如果沒有單色器進行分光,就無法準確測定樣品對不同波長光的吸收情況。
組成結構與原理
棱鏡單色器:一般由玻璃或石英制成的棱鏡構成。當復合光進入棱鏡后,由于不同波長的光在棱鏡中的折射率不同,光會被分解成不同角度的光譜。通過調整棱鏡的角度,可以選擇特定波長的光輸出。例如,在簡單的分光裝置中,白色光經過棱鏡后形成紅、橙、黃、綠、藍、靛、紫等不同顏色的光帶,通過移動狹縫位置就可以獲取其中單一波長的光。
光柵單色器:它利用光柵的衍射原理進行分光。光柵上有許多密集的刻痕或條紋,當復合光照射到光柵上時,會發生衍射現象,不同波長的光在空間上的衍射角度不同。通過轉動光柵,可以改變衍射光的角度,從而選擇出特定波長的光。光柵單色器具有較高的分辨率和較寬的波長范圍,在超微量分光光度計中應用廣泛。
三、樣品室
作用
樣品室是用來放置待測樣品的地方,它為樣品提供了一個相對穩定的測量環境。在測量過程中,樣品室內的樣品會受到光源發出的單色光的照射,未被樣品吸收的光會透過樣品到達檢測器。
特點與要求
樣品室通常具有精確的溫度控制功能,因為溫度會對樣品的吸光度產生影響。對于一些對溫度敏感的樣品,如酶促反應體系中的酶活性檢測,保持恒定的溫度至關重要。此外,樣品室的設計要保證光線能夠順利通過,且不會發生散射或反射等影響測量準確性的情況。有些樣品室還配備了攪拌裝置,用于在測量過程中使樣品均勻混合,避免因樣品濃度不均勻而導致測量誤差。
四、檢測器
作用
檢測器的主要功能是將透過樣品后的光信號轉換為電信號。它是超微量分光光度計的核心部件之一,直接決定了儀器的靈敏度和測量精度。檢測器對不同波長的光具有響應能力,并且能夠將光的強度變化準確地轉化為可測量的電信號。
類型
光電倍增管(PMT):它是一種常用的檢測器,具有高的靈敏度。光電倍增管內部有一個光電陰極和一個陽極,以及一系列的倍增電極。當光子照射到光電陰極上時,會產生光電子,這些光電子在電場作用下被加速并依次撞擊倍增電極,每碰撞一次就會釋放出更多的電子,從而使電流得到放大。它主要應用于紫外和可見光區域,尤其適用于檢測微弱光信號。
二極管陣列檢測器:這種檢測器由多個二極管組成陣列。它可以同時檢測多個波長的光,能夠快速獲取樣品在不同波長下的吸光度信息。二極管陣列檢測器具有良好的線性范圍和較快的響應速度,在全波長掃描等復雜測量模式下具有優勢。
五、數據處理系統
作用
數據處理系統是超微量分光光度計的控制中心和數據分析中樞。它負責控制儀器的各個部件(如光源、單色器、檢測器等)協同工作,并且對檢測器傳來的電信號進行處理和分析,最終將測量結果顯示給用戶。
功能與組成
數據采集與轉換:將從檢測器輸出的模擬電信號轉換為數字信號,以便后續處理。這通常通過模數轉換器(ADC)實現,ADC的性能直接影響數據的采集精度。
軟件操作系統:數據處理系統中的軟件提供了操作界面,用戶可以通過軟件控制儀器的參數設置(如波長選擇、測量模式、樣品室溫度設定等),同時軟件還具備數據分析功能,如計算吸光度、濃度、繪制光譜曲線等。一些先進的數據處理系統還能夠與其他設備(如計算機網絡、實驗室信息管理系統等)進行數據交互和共享。