ND2000超微量分光光度計是一種專為微量樣本設計的分光光度計,可檢測低至1-2μL的核酸、蛋白質等生物分子的濃度和純度。其核心原理基于朗伯-比爾定律(A=εcl),通過測量特定波長(如DNA 260 nm、蛋白質280 nm)的光吸收值,計算樣本濃度。其主要由光源、單色器、樣品室、檢測器和數據處理系統組成。光源通常采用氘燈,它能發出連續的紫外光譜。單色器(如光柵或棱鏡)用于從光源發出的廣譜光線中選擇出單一波長的光。樣品室內放置了微量樣品池,其路徑長度通常在幾毫米到幾厘米之間,以適應微量樣品的測量需求。檢測器則負責捕捉經過樣品吸收后的光線強度,最后由數據處理系統進行分析和計算。
ND2000超微量分光光度計的操作指南通常包括以下步驟:
1、儀器準備
接通電源與預熱:將超微量分光光度計的電源線插好,打開電源開關,等待儀器軟件初始化。不同型號的儀器預熱時間可能有所不同,一般需要預熱15分鐘至30分鐘,使其溫度穩定,確保儀器處于最佳工作狀態。
清潔樣品池:檢查樣品池是否干凈,如有污染或殘留液體,需用適當的溶劑(如70%乙醇)輕輕擦拭干凈,并用無塵紙擦干。注意避免刮傷樣品池表面。
儀器校準:使用已知濃度的標準物質進行儀器校準,校準操作根據儀器型號可能有所差異,請參考儀器說明書。這一步是為了確保測量結果的準確性和可靠性。
2、設置測量參數
選擇測量波長:根據待測物質的特性和實驗要求,選擇合適的測量波長。不同的物質在特定波長下有最大吸收峰,選擇該波長可以獲得最佳的測量靈敏度和準確性。例如,對于DNA的測量,通常選擇260nm和280nm的波長。
確定光程長度:光程長度是指光線通過樣品的距離,一般為1cm。但部分超微量分光光度計的光程較短,如0.5mm、1mm等,具體需根據儀器型號和樣品特性來確定。
設定測量模式:常見的測量模式有吸光度模式、濃度模式、透過率模式等。吸光度模式用于直接測量樣品的吸光度值;濃度模式可以根據標準曲線自動計算樣品的濃度;透過率模式則用于測量樣品的透光率。用戶需根據實驗目的和樣品情況選擇合適的測量模式。
3、樣品測量
空白對照調零:在進行樣品測量之前,通常需要進行空白對照調零,以消除溶劑、比色皿等因素對測量結果的影響。取適量的空白溶劑(如蒸餾水、緩沖液等),加到檢測基座上,放下樣品臂,浸泡一段時間(如2-3分鐘),然后用無塵紙將檢測基座擦拭干凈。之后點擊調零按鈕,使儀器以空白溶劑為空白對照進行調零。
加入樣品:將待測樣品用移液器吸取適量,加到檢測基座上。注意加樣時要緩慢、準確,避免產生氣泡或溢出。對于一些需要稀釋的樣品,應先進行適當的稀釋處理,使其濃度在儀器的線性范圍內。
開始測量:放下樣品臂,使樣品與檢測基座充分接觸。然后點擊測量按鈕,儀器將自動記錄并顯示樣品的吸光度值、濃度或其他相關參數。測量完成后,屏幕會顯示測量結果,包括吸光度、濃度、A260/A280比值等信息。
4、數據處理與記錄
查看結果:測量完成后,仔細查看儀器顯示的測量結果,確認數據的準確性和可靠性。如果需要進行多次測量,可以記錄每次的測量結果,并計算平均值和標準差。
保存數據:將測量結果保存到計算機或打印機中,以便后續分析和處理。可以使用儀器自帶的軟件或第三方軟件進行數據處理和分析。