蛋白純化注意事項(xiàng)

1.  選擇表達(dá)載體時(shí)，要根據(jù)所表達(dá)蛋白的最終應(yīng)用考慮。如為方便純化，可選擇融合表達(dá)；如為獲得天然蛋白，可選擇非融合表達(dá)。

 

2.  融合表達(dá)時(shí)在選擇外源DNA同載體分子連接反應(yīng)時(shí)，對轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯過程中密碼結(jié)構(gòu)的閱讀不能發(fā)生干擾。

3.  菌液OD值要小于1，否則細(xì)胞太濃太老，不易破碎，且質(zhì)粒易丟失。

4.  誘導(dǎo)時(shí)間最好做一個(gè)梯度，不同蛋白誘導(dǎo)時(shí)間需摸索。

5.  誘導(dǎo)溫度適當(dāng)摸索：25、30℃。

6.  IPTG濃度：一般在1 mM 以內(nèi)，可適當(dāng)摸索。

7.  超聲條件可視實(shí)際情況改變，只要使菌體裂解充分即可，即菌液清亮不粘稠。